Untersuchungen kombinierter DNA-Protein-Transduktion zur Optimierung nicht-viralen Gentransfers

Zur Etablierung eines rekombinanten phiC31-TAT-Systems für den nicht-viralen Gentransfer wurden verschiedene phiC31-Integrase-Konstrukte in E. coli BL21 Bakterien rekombinant exprimiert, chromatographisch aufgereinigt und sowohl im Reagenzglas als auch in renalen, alveolären und T-Zelllinien auf Fun...

Verfasser: Bohla, Alexander
Weitere Beteiligte: Weber, Wolf-Michael (Gutachter)
FB/Einrichtung:FB 13: Biologie
Dokumenttypen:Dissertation/Habilitation
Medientypen:Text
Erscheinungsdatum:2011
Publikation in MIAMI:06.04.2011
Datum der letzten Änderung:20.05.2016
Angaben zur Ausgabe:[Electronic ed.]
Schlagwörter:phiC31; Integrase; Gentransfer; nichtviral; Rekombinase; Expression
Fachgebiet (DDC):570: Biowissenschaften; Biologie
Lizenz:InC 1.0
Sprache:Deutsch
Format:PDF-Dokument
URN:urn:nbn:de:hbz:6-54469533561
Permalink:https://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:hbz:6-54469533561
Onlinezugriff:diss_bohla.pdf

Zur Etablierung eines rekombinanten phiC31-TAT-Systems für den nicht-viralen Gentransfer wurden verschiedene phiC31-Integrase-Konstrukte in E. coli BL21 Bakterien rekombinant exprimiert, chromatographisch aufgereinigt und sowohl im Reagenzglas als auch in renalen, alveolären und T-Zelllinien auf Funktionalität getestet. Zur Transduktion dieser Integrase-Plasmid-Komplexe in unterschiedliche Zelltypen wurden verschiedene Transduktionsmethoden verwendet. Stellvertretend für Lunge, Niere und Lymphozyten wurden A549-, 293- und Jurkat-T-Zellen mit Komplexen aus rekombinanter Integrase und einem Luziferase-attB-Plasmid behandelt und über einen Zeitraum von einem Monat auf Luziferaseexpression getestet. Der kombinierte phiC31-Integraseprotein-Plasmid-Transfer ist eine vielversprechende Anwendung für den nicht-viralen Gentransfer, was insbesondere durch die Vermittlung stabiler Langzeittransgenexpression in verschiedenen Zelltypen gezeigt werden konnte.