TRPC1-Kanäle bei der druckabhängigen Aktivierung von pankreatischen Sternzellen

Die Quelle des Stromas im Pankreaskarzinom sind pankreatische Sternzellen (PSCs). Diese werden durch den erhöhten hydrostatischen Druck im Pankreaskarzinom aktiviert. Daran ist der Kationenkanal TRPC1 beteiligt, der in manchen Zellarten am store operated calcium entry (SOCE) beteiligt ist. Diese Arb...

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Verfasser: Gruner, Matthias
Weitere Beteiligte: Schwab, Albrecht (Gutachter)
Dokumenttypen:Dissertation/Habilitation
Medientypen:Text
Erscheinungsdatum:2020
Publikation in MIAMI:14.08.2020
Datum der letzten Änderung:21.08.2020
Angaben zur Ausgabe:[Electronic ed.]
Schlagwörter:TRPC1; Druck; Pankreatische Sternzellen; Mechanosensitive Ionenkanäle; SOCE; Pankreatisches duktales Adenokarzinom
Lizenz:CC BY-SA 4.0
Sprache:Deutsch
Hochschulschriftenvermerk:Münster (Westfalen), Univ., Diss., 2020
Format:PDF-Dokument
URN:urn:nbn:de:hbz:6-10149597524
Permalink:https://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:hbz:6-10149597524
Onlinezugriff:diss_gruner.pdf
Inhaltsverzeichnis:
  • 1 Einleitung ........................................................................................... 1
  • 1.1 Pankreaskrebs .......................................................................... 1
  • 1.2 Desmoplasie/Tumorstroma .................................................... 1
  • 1.3 Pankreatische Sternzellen ................................................ 2
  • 1.3.1 PSCs in Ruhe ................................................................... 2
  • 1.3.2 Aktivierung der PSCs ............................................................ 2
  • 1.3.3 Rolle der PSCs im PDAC............................................................ 4
  • 1.4 Mechanik .......................................................................................... 5
  • 1.4.1 Mechanosensibilität ................................................................. 6
  • 1.4.2 Erhöhter Druck im PDAC .................................................................... 6
  • 1.4.3 Wirkung von Druck auf PSCs ....................................................... 7
  • 1.5 TRPC1 ................................................................................................ 8
  • 1.5.1 TRPC1 als mechanosensitiver Kanal ..................................................10
  • 1.5.2 TRPC1 im store operated calcium entry ..........................................10
  • 2 Zielsetzung .....................................................................................13
  • 3 Methoden...............................................................................................14
  • 3.1 Zellkultur .........................................................................................14
  • 3.1.1 Kulturbedingungen .............................................................14
  • 3.1.2 Passage der Zellen und Zellzählung ...........................................14
  • 3.2 Mäuse und TRPC1-KO .....................................................................15
  • 3.3 Isolation der PSCs ..............................................................................16
  • 3.4 Druckbehandlung ..............................................................................17
  • 3.5 Nachweis von Lipidtröpfchen ...............................................................18
  • 3.5.1 Experimentaufbau .................................................................18
  • 3.5.2 Nile Red-Färbung ....................................................................18
  • 3.5.3 Fluoreszenzmikroskopie und Auswertung .........................................19
  • 3.6 α-SMA-Färbung .................................................................................19
  • 3.6.1 Immunfluoreszenzfärbung .............................................................20
  • 3.6.2 Fluoreszenzmikroskopie und Auswertung ............................................20
  • 3.7 Zellmigration .....................................................................................21
  • 3.7.1 Vorbereitung der Migrationsexperimente .............................................21
  • 3.7.2 Druckerzeugung und Versuchsaufbau der Migrationsexperimente .............22
  • 3.7.3 Auswertung der Migration ...................................................23
  • 3.8 Ca2+-Messungen ................................................................................24
  • 3.8.1 Vorbereitung der Zellen und Aufbau ................................................25
  • 3.8.2 Ablauf der Messung .......................................................................26
  • 3.8.3 Auswertung .....................................................................................27
  • 3.9 Statistik und graphische Darstellung .....................................................29
  • 4 Ergebnisse .......................................................................................30
  • 4.1 Beschleunigung des Verlustes von Lipidtröpfchen durch Druck .............30
  • 4.2 α-SMA-Färbung ...........................................................................32
  • 4.2.1 Vermehrte α-SMA-Fluoreszenz durch Druck nur in WT-PSCs ....................34
  • 4.2.2 Kleinere und rundere PSCs bei TRPC1-KO .................................36
  • 4.3 Migration ........................................................................................39
  • 4.3.1 Stärkerer Anstieg der Geschwindigkeit unter Druck .........................39
  • 4.3.2 Kleinere Fläche der PSCs unter Druck ......................................43
  • 4.4 Ca2+-Messungen ............................................................................45
  • 4.4.1 Keine Unterschiede des Ca2+ in unstimulierten PSCs .......................47
  • 4.4.2 Erhöhtes Speicher-Ca2+ in TRPC1-KO-PSCs ...................................47
  • 4.4.3 Kein Unterschied im SOCE zwischen WT- und TRPC1-KO-PSCs ..............49
  • 4.4.4 Blockade des SOCEs ..................................................................51
  • 5 Diskussion ............................................................................................53
  • 5.1 Experimentelle Erzeugung des Druckes ..................................................53
  • 5.2 Schnellere Aktivierung ruhender PSCs durch Druck .........................54
  • 5.2.1 Aktivierung durch die Zellkultur ..............................................54
  • 5.2.2 Aktivierung durch Druck .............................................57
  • 5.3 TRPC1 als notwendiger Bestandteil der druckabhängigen Aktivierung .......58
  • 5.4 Die Rolle der TRPC1-Kanäle für den Ca2+-Haushalt der PSCs ........59
  • 5.4.1 Erhöhtes Speicher-Ca2+ in TRPC1-KO-PSCs ........................60
  • 5.4.2 Keine direkte Rolle von TRPC1 im SOCE in PSCs .............61
  • 5.5 Mechanismus der Druckaktivierung und Rolle des TRPC1 ............63
  • 5.5.1 TRPC1 als Druck-Mechanosensor ............................63
  • 5.5.2 TRPC1 in der autokrinen Stimulation ......................65
  • 5.6 Pathophysiologischer Kontext und Ausblick ............................66
  • 6 Materialien und Geräte ......................................................................68
  • 6.1 Chemikalien und Verbrauchsmaterial ...........................................68
  • 6.2 Geräte .............................................................................................70
  • 6.3 Software ..........................................................................................71
  • 7 Literaturverzeichnis .................................................................................73
  • 8 Abkürzungsverzeichnis ...........................................................................83
  • 9 Abbildungsverzeichnis ...........................................................................85
  • 10 Tabellenverzeichnis................................................................................86
  • 11 Danksagung ........................................................................................87
  • 12 Lebenslauf ..........................................................................................88.

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