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|a 610 Medizin und Gesundheit
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1 |
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|a Wischmann, Franz-Josef
|0 http://d-nb.info/gnd/1149931612
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2 |
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|a Universitäts- und Landesbibliothek Münster
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| 245 |
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0 |
|a Untersuchungen zum Einfluss des Epidermal Growth Factor Receptors auf die Reifung bestimmter mikro-RNAs als zelluläre Strahlenantwort
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| 250 |
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|a [Electronic ed.]
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| 264 |
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1 |
|c 2017
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| 264 |
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2 |
|b Universitäts- und Landesbibliothek Münster
|c 2018-01-05
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| 505 |
0 |
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|a 1 EINLEITUNG ................................................................................ 1 -- 1.1 Krebserkrankungen in der Bundesrepublik Deutschland ............... 2 -- 1.1.1 Mammakarzinom ............................................................... 2 -- 1.1.2 Lungenkarzinom ................................................................ 6 -- 1.2 Rezeptor-Tyrosinkinasen .......................................................... 8 -- 1.2.1 Physiologie von Rezeptor-Tyrosinkinasen am Beispiel des Epidermal Growth Factor Receptor ............................................... 9 -- 1.2.2 Pathologie von Rezeptor-Tyrosinkinasen am Beispiel des Epidermal Growth Factor Receptor im Mammakarzinom ................ 12 -- 1.3 Mikro-RNAs ........................................................................... 14 -- 1.3.1 Transkription, Spleißen, Nucleus-Export, Reifung und Gene-silencing von mikro-RNAs am Beispiel der miR-218 ....................... 15 -- 1.3.2 Bedeutung von mikro-RNA-Fehlregulationen bei Krebs-Erkrankungen .......................................................................... 19 -- 1.4 Ionisierende Strahlung und ihr Einfluss auf biologische Systeme und biologisch funktionelle Moleküle .................................................... 22 -- 1.5 Zielsetzung der Arbeit ............................................................ 26 -- 2 MATERIAL & METHODEN .............................................................. 28 -- 2.1 Material ................................................................................ 28 -- 2.1.1 Chemikalien ..................................................................... 28 -- 2.1.2 Puffer und Lösungen ......................................................... 30 -- 2.1.3 Zelllinien ......................................................................... 32 -- 2.1.4 Zellkulturmedien und Zusätze ............................................ 35 -- 2.1.5 Enzyme ........................................................................... 36 -- 2.1.6 Primer ............................................................................ 37 -- 2.1.6.1 Housekeeping Gen Assay ............................................. 38 -- 2.1.7 TaqMan® Sonden.............................................................. 39 -- 2.1.8 TaqMan® MicroRNA Assays ................................................ 39 -- 2.1.9 Antikörper ....................................................................... 40 -- 2.1.9.1 Unkonjugierte Primärantikörper .................................... 40 -- 2.1.9.2 Konjugierte Sekundärantikörper ................................... 41 -- 2.1.9.3 Konjugierte Primär-Antikörper ...................................... 42 -- 2.1.10 RNAi Anwendungen ........................................................ 42 -- 2.1.11 Geräte .......................................................................... 42 -- 2.1.12 Verwendete Kits ............................................................. 44 -- 2.1.13 Verbrauchsmaterial ......................................................... 45 -- 2.1.14 Software ....................................................................... 46 -- 2.1.15 Online Datenbanken ....................................................... 46 -- 2.2 Methoden ............................................................................. 47 -- 2.2.1 Zellkultur ........................................................................ 47 -- 2.2.2 Transiente Transfektion ..................................................... 47 -- 2.2.3 RNA Isolation ................................................................... 48 -- 2.2.3.1 total-RNA Isolation ...................................................... 48 -- 2.2.3.2 mikro-RNA Isolation .................................................... 48 -- 2.2.5 cDNA Synthese ................................................................ 48 -- 2.2.5.1 cDNA Synthese von total-RNA Isolaten .......................... 48 -- 2.2.5.2 cDNA Synthese von mikro-RNA Isolaten ........................ 49 -- 2.2.6 PCR und qPCR .................................................................. 50 -- 2.2.6.1 PCR ........................................................................... 50 -- 2.2.6.2 qPCR mit SYTO9 ......................................................... 51 -- 2.2.6.3 qPCR mit TaqMan® Assay ............................................. 53 -- 2.2.7 Bestrahlung von Zellen ..................................................... 54 -- 2.2.8 Vorbehandlung von Zellen mit Cytochalasin D oder Tyrphostin vor Bestrahlung ........................................................................ 55 -- 2.2.9 Western Blot .................................................................... 57 -- 2.2.10 Immunfluoreszenzfärbung und Fluoreszenzmikroskopie ....... 57 -- 2.2.11 Durchflusszytometrie ...................................................... 58 -- 2.2.12 Luc-Pair Duo-Luciferase Assay .......................................... 59 -- 2.2.13 Zell-Invasions-Assay ....................................................... 59 -- 2.2.14 Digitale-Holographische-Mikroskopie ................................. 60 -- 2.2.15 Statistik ........................................................................ 61 -- 3 ERGEBNISSE .............................................................................. 63 -- 3.1 EGFR Expression und miR-218 Reifung in verschiedenen Zelllinien ................................................................................................. 63 -- 3.1.1 EGFR Transkription in verschiedenen Zelllinien ..................... 63 -- 3.1.2 Reifung von miR-218 in verschiedenen Zelllinien .................. 64 -- 3.1.3 Zusammenhang zwischen EGFR Expression und miR-218 Reifung in verschiedenen Zelllinien ............................................. 65 -- 3.2 Zielsequenzen von miR-218 ................................................. 67 -- 3.2.1 Ergebnisse der Target Scan Abfrage für Ziel-mRNAs von miR-218 ......................................................................................... 67 -- 3.2.2 Experimentelle Überprüfung der potentiellen Zielsequenzen von miR-218 .................................................................................. 69 -- 3.2.2.1 Luciferase-Test für EGFR 3´ UTR und miR-218 in MDA-MB-231 Zellen ............................................................................ 69 -- 3.2.2.2 Einfluss der pre-miR-218 Transfektion auf verschiedene mRNAs von MDA-MB-231, BT474 und A549 Zellen ..................... 70 -- 3.2.2.3 Einfluss der pre-miR-218 Transfektion auf die Tanslation verschiedener Proteine von MDA-MB-231, BT474 und A549 Zellen ........................................................................................... 72 -- 3.3 Einfluss von miR-218 auf die Zellphysiologie ............................. 74 -- 3.3.1 Einfluss der pre-miR-218 Transfektion auf die Aktivierung des MAPK Signalweges in MDA-MB-231 Zellen ................................... 74 -- 3.3.2 Einfluss der pre-miR-218 Transfektion auf die Zellmotilität, Zellfläche und Zelltrockenmasse in MDA-MB-231 Zellen ................ 76 -- 3.3.3 Einfluss der pre-miR-218 Transfektion auf die Mitose in MDA-MB-231, BT474 und A549 Zellen ................................................ 80 -- 3.3.4 Einfluss der pre-miR-218 Transfektion auf die Invasivität in MDA-MB-231 Zellen .................................................................. 84 -- 3.4 Einfluss von ionisierender Strahlung auf die Reifung von mikro-RNAs und den daran beteiligten molekularen Bestandteilen .............. 85 -- 3.4.1 Micro-Array Analyse zur Identifikation radiosensitiver miRs ... 85 -- 3.4.1.1 Veränderung der miRs miR-15a, miR-19a, miR-21, miR-100, miR-101, miR-106b und miR-218 4h nach 2Gy Bestrahlung mit und ohne transientem EGFR Knock Down in BT474 Zellen ..... 87 -- 3.4.1.2 Veränderung der miRs miR-15a, miR-19a, miR-21, miR-100, miR-101, miR-106b und miR-218 4h nach 5Gy Bestrahlung mit und ohne transientem EGFR Knock Down in BT474 Zellen ..... 88 -- 3.4.1.3 Veränderung der miRs miR-15a, miR-19a, miR-21, miR-100, miR-101, miR-106b und miR-218 4h nach 2Gy Bestrahlung mit und ohne transientem EGFR Knock Down in A549 Zellen ....... 90 -- 3.4.1.4 Veränderung der miRs miR-15a, miR-19a, miR-21, miR-100, miR-101, miR-106b und miR-218 4h nach 5Gy Bestrahlung mit und ohne transientem EGFR Knock Down in A549 Zellen ....... 91 -- 3.4.2 Einfluss von Tyrosinkinaseinhibition und der Inhibition der Endozytose auf die strahlenabhängige miR-218 Reifung ................ 93 -- 3.4.2.1 Einfluss von Tyrosinkinaseinhibition und der Inhibition der Endozytose auf die strahlenabhängige miR-218 Reifung in BT474 Zellen ................................................................................... 93 -- 3.4.2.2 Einfluss von Tyrosinkinaseinhibition und der Inhibition der Endozytose auf die strahlenabhängige miR-218 Reifung in A549 Zellen ................................................................................... 95 -- 3.4.3 Strahleninduzierte Argonaut2 Phosphorylierung in BT474 und A549 ....................................................................................... 96 -- 3.4.4 Strahleninduzierte EGFR Translokation ................................ 98 -- 3.4.5 Strahleninduzierte Phosphorylierung von EGFR-Tyr-1068 in A549 ..................................................................................... 105 -- 3.4.6 Co-Lokalisation von EGFR und p-AGO2 in A549 und BT474 .. 106 -- 4 DISKUSSION ............................................................................ 111 -- 5 LITERATURVERZEICHNIS ........................................................... 126 -- 6 DANKSAGUNG .......................................................................... 150 -- 7 LEBENSLAUF ............................................................................. 151 -- ABBILDUNGSVERZEICHNIS ............................................
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|a free access
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|a In dieser Arbeit konnte gezeigt werden, dass der Epidermal Growth Factor Receptor, ein Mitglied der Rezeptor-Tyrosinkinase Familie und Argonaut2, ein an der RNA-Interferenz beteiligtes Protein, die zelluläre Strahlenantwort auf der Ebene der mikro-RNA Reifung beeinflussen. Mikro-RNAs sind kleine 20-25 Nukleotide lange RNA Moleküle, die Einfluss auf die posttranskriptionale Genregulation nehmen. Es konnte gezeigt werden, dass die mikro-RNAs miR-15a, miR-19a, miR-21, miR-100, miR-106b und miR-218 dem Regulierungssystem aus Epidermal Growth Factor Receptor und Argonaut2 unterliegen. Darüber hinaus konnte die Tumorsuppressorfunktion von miR-218 gezeigt werden, die neben EGFR auch Birc5, Birc6, Decorin, Notch2, Robo1, Tenascin C und Tob1 reguliert und damit Einfluss auf die Invasivität, Motilität, das Zellwachstum sowie das Zellteilungsverhalten nimmt. Die vorliegenden Daten sprechen für eine Feinregulierung der Strahlenantwort von EGFR durch miR-218.
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|a specialized
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|a InC 1.0
|u https://rightsstatements.org/vocab/InC/1.0/
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|a mikro-RNA
|a AGO2
|a EGFR
|a Bestrahlung
|a miR-Reifung
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|2 DRIVER Types
|a Dissertation/Habilitation
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|2 DCMI Types
|a Text
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|a Greve, Burkhard
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|3 Zum Volltext
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|u https://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:hbz:6-59199471676
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