Beeinflussung von Osteoblasten und Endothelzellen durch Zoledronat in vitro

Zielsetzung: Um Hinweise zur Pathogenese der Bisphosphonat-assoziierten Osteonekrose im Kiefer (BP-ONJ) zu sammeln, wurden bovine Osteoblasten-ähnliche Zellen (OBs) und Endothelzellen aus humaner Vena umbilica (HUVECs) in vitro untersucht. Methode: OBs und HUVECs wurden über 14 Tage bei 0,01, 0,1, 1...

Author: Beckmann, Eva
Further contributors: Kleinheinz, Johannes (Thesis advisor)
Document types:Doctoral thesis
Media types:Text
Publication date:2014
Date of publication on miami:29.08.2014
Modification date:23.01.2020
Edition statement:[Electronic ed.]
Subjects:Zoledronat; Osteoblasten; Endothelzellen; Bisphosphonat-assoziierte Osteonekrose im Kiefer; Bisphosphonate; in vitro
DDC Subject:610: Medizin und Gesundheit
License:InC 1.0
Language:German
Format:PDF document
URN:urn:nbn:de:hbz:6-32329406184
Permalink:http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:hbz:6-32329406184
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505 0 |a Inhalt -- I. Einleitung ........................................................................ 1 -- I.1. Bisphosphonate .......................................................... 1 -- I.1.1. Indikation .................................................................... 1 -- I.1.2. Kontraindikation ........................................................... 1 -- I.1.3. Historie ....................................................................... 2 -- I.1.4. Verschreibungszahlen .................................................... 2 -- I.1.5. Synthese und chemischer Aufbau ................................... 3 -- I.1.6. Klassifikation in Generationen ........................................ 4 -- I.1.7. Pharmakokinetik ........................................................... 5 -- I.1.8. Wirkungsweise ............................................................. 6 -- I.1.8.a. molekulare Ebene ........................................................... 6 -- I.1.8.b. zelluläre Ebene .............................................................. 11 -- I.1.8.c. gewebliche Ebene ........................................................... 12 -- I.1.9. Nebenwirkungen ......................................................... 13 -- I.1.10. Wechselwirkungen .................................................... 14 -- I.2. Bisphosphonat-assoziierte Kiefernekrose ..................... 15 -- I.2.1. Historie ..................................................................... 15 -- I.2.2. Begriff ....................................................................... 15 -- I.2.3. Definition ................................................................... 16 -- I.2.4. Klinik ........................................................................ 16 -- I.2.5. Differenzialdiagnosen .................................................. 17 -- I.2.6. Staging ..................................................................... 17 -- I.2.7. Risikofaktoren ............................................................ 18 -- I.2.8. Komplikationen .......................................................... 19 -- I.2.9. Inzidenz und Prävalenz ................................................ 19 -- I.2.10. Therapie .................................................................. 20 -- I.2.11. Ätiologie und Pathogenese ......................................... 22 -- I.3. Osteoblasten und Knochenumbau ............................... 26 -- I.4. Endothelzellen und Angiogenese ................................. 29 -- I.5. Zielsetzung .............................................................. 31 -- II. Material und Methoden ............................................ 32 -- II.1. Material .................................................................. 32 -- II.1.1. Material für die Zellkultur ........................................... 32 -- II.1.1.a. Zellen .......................................................................... 32 -- II.1.1.b. Nährmedien ................................................................. 32 -- II.1.1.c. Reagenzien und Lösungen .............................................. 33 -- II.1.2. Material für die Untersuchungsmethoden ...................... 36 -- II.1.2.a. MTT-Assay ................................................................... 36 -- II.1.2.b. Cell-Count ................................................................... 36 -- II.1.2.c. Färbungen.................................................................... 36 -- II.1.3. Medikament .............................................................. 38 -- II.1.4. Geräte und Verbrauchsmaterialien ............................... 39 -- II.2. Methoden ............................................................... 41 -- II.2.1. Gewinnung der Zellen ................................................ 41 -- II.2.1.a. Gewinnung der Osteoblasten .......................................... 41 -- II.2.1.b. Gewinnung der Endothelzellen ........................................ 43 -- II.2.2. Festlegen der Medikamentenkonzentrationen ................ 46 -- II.2.3. Untersuchungsmethoden ............................................ 48 -- II.2.3.a. MTT-Assay ................................................................... 48 -- II.2.3.b. Cell-Count ................................................................... 51 -- II.2.3.c. Färbungen.................................................................... 52 -- II.2.3.c.1. Immunfärbung mit Alexa-Fluor® ................................ 54 -- II.2.3.c.2. Immunfärbung mit Dako EnVision® ............................ 55 -- II.2.3.c.3. Richardsonfärbung ................................................... 57 -- II.2.4. Statistische Methoden zur Auswertung ......................... 58 -- III. Ergebnisse ............................................................. 59 -- III.1. Ergebnisse der Fotodokumentation ........................... 59 -- III.1.1. Fotodokumentation der Osteoblasten .......................... 59 -- III.1.2. Fotodokumentation der Endothelzellen ........................ 63 -- III.2. Ergebnisse der MTT-Assays ..................................... 67 -- III.2.1. MTT-Assay der Osteoblasten ...................................... 67 -- III.2.2. MTT-Assay der Endothelzellen .................................... 71 -- III.3. Ergebnisse der Cell-Counts ...................................... 75 -- III.3.1. Cell-Count der Osteoblasten ...................................... 75 -- III.3.2. Cell-Count der Endothelzellen .................................... 79 -- III.4. Ergebnisse der Färbungen ....................................... 82 -- III.4.1. Ergebnisse der Alexa-Fluor®-Immunfärbung ................ 82 -- III.4.1.a. Alexa-Fluor®-Färbung der Osteoblasten .......................... 82 -- III.4.1.b. Alexa-Fluor®-Färbung der Endothelzellen ........................ 83 -- III.4.2. Ergebnisse der Dako EnVision®-Immunfärbung ............ 84 -- III.4.2.a. Dako EnVision®-Färbung der Osteoblasten ...................... 84 -- III.4.2.b. Dako EnVision®-Färbung der Endothelzellen .................... 86 -- III.4.3. Ergebnisse der Richardsonfärbung .............................. 88 -- III.4.3.a. Richardsonfärbung der Osteoblasten .............................. 88 -- III.4.3.b. Richardsonfärbung der Endothelzellen ............................ 89 -- IV. Diskussion .............................................................. 90 -- IV.1. Einordnung der Ergebnisse ....................................... 90 -- IV.2. Studienlage ............................................................ 91 -- IV.2.1. Effekte auf Proliferationsrate und Stoffwechselaktivität .. 92 -- IV.2.1.a. Proliferation und Stoffwechselaktivität der Osteoblasten .... 92 -- IV.2.1.b. Proliferation und Stoffwechselaktivität der Endothelzellen . 94 -- IV.2.2. Effekte auf Morphologie und Gestalt der Zellen ............. 97 -- IV.2.2.a. Morphologie und Gestalt der Osteoblasten ....................... 97 -- IV.2.2.b. Morphologie und Gestalt der Endothelzellen .................... 97 -- IV.2.3. Effekte auf die Expression und Synthese von Proteinen . 99 -- IV.3. Fehleranalyse der Vorgehensweise .......................... 101 -- IV.3.1. Isolierung und Kultivierung der Zellen ....................... 101 -- IV.3.1.a. Isolierung und Kultivierung der Osteoblasten ................. 101 -- IV.3.1.b. Isolierung und Kultivierung der Endothelzellen ............... 101 -- IV.3.2. Versuchsdauer ........................................................ 103 -- IV.3.3. Verwendete Medikamentenkonzentration ................... 105 -- IV.3.3.a. Medikamentenkonzentration in den Osteoblastenkulturen 105 -- IV.3.3.b. Medikamentenkonzentration in den Endothelzellkulturen . 107 -- IV.3.4. Auswahl der Untersuchungsmethoden ....................... 109 -- IV.4. Erklärung der Ergebnisse ....................................... 111 -- IV.5. Schlussfolgerung .................................................. 113 -- IV.6. Ausblick und weitere Versuchsansätze ..................... 115 -- Literaturverzeichnis ................................................... 117 -- Abkürzungsverzeichnis .............................................. 133 -- Abbildungsverzeichnis ................................................ 136 -- Tabellenverzeichnis .................................................... 137 -- Lebenslauf .................................................................. 138 -- Danksagung ............................................................... 139 -- Anhang ............................................................................ I -- I. Messdaten .................................................................... I -- I.1. Analysedaten der MTT-Assays ........................................... I -- I.1.1. Daten der Osteoblasten ....................................................... I -- I.1.2. Daten der Endothelzellen ................................................... III -- I.2. Analysedaten der Cell-Counts ........................................... V -- I.2.1. Daten der Osteoblasten ...................................................... V -- I.2.2. Daten der Endothelzellen .................................................. VII -- II. Ethikvotum ................................................................ IX. 
506 0 |a free access 
520 3 |a Zielsetzung: Um Hinweise zur Pathogenese der Bisphosphonat-assoziierten Osteonekrose im Kiefer (BP-ONJ) zu sammeln, wurden bovine Osteoblasten-ähnliche Zellen (OBs) und Endothelzellen aus humaner Vena umbilica (HUVECs) in vitro untersucht. Methode: OBs und HUVECs wurden über 14 Tage bei 0,01, 0,1, 1 und 10 µM Zometa® (Zoledronsäure) kultiviert. An 6 Zeitpunkten wurden Stoffwechselaktivität (MTT-Assay) und Proliferationsrate (Cell-Count auf Fotos) ermittelt. Immunhistologische Färbungen zeigten die Expression von zellspezifischen Proteinen und ermöglichten die Dokumentation von Morphologieveränderungen. Ergebnisse: Für die OBs war ein positiver Proliferationseffekt festzustellen. Für die HUVECs ließ sich kein verändertes Verhalten nachweisen. Diskussion: Zoledronsäure führt zu einer gesteigerten Proliferation von OBs. Zusammen mit den bereits bekannten antiangiogenetischen und Osteoklastenresorptionsinhibierenden Wirkungen könnte dies mit zur Pathogenese einer BP-ONJ beitragen.<br><br> 
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653 0 |a Zoledronat  |a Osteoblasten  |a Endothelzellen  |a Bisphosphonat-assoziierte Osteonekrose im Kiefer  |a Bisphosphonate  |a in vitro 
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