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Die Rolle der Mikroglia bei der Pathogenese der altersbedingten Makuladegeneration

Mikroglia, die immunkompetenten Zellen des ZNS, sind an pathologischen Prozessen der choroidalen Neovaskularisation (CNV) bei der altersbedingten Makuladegeneration (AMD) beteiligt. Allerdings gibt es nur begrenzte Kenntnisse über ihre Rolle bei dieser Erkrankung. In dieser Arbeit wurden verschiedene Aspekte der Mikroglia mit dem Modell der laserinduzierten CNV untersucht. Es sollte überprüft werden, ob und inwieweit sich durch immunmodulierende Substanzen die Migration der Mikroglia zu den Laserherden und das Ausmaß der Neovaskularisation eindämmen lässt. Es konnte gezeigt werden, dass Minocyclin und TKP die Migration der Mikroglia zu den Laserherden und das Ausmaß der Neovaskularisation signifikant reduziert. Auch die Genexpression von proangiogenen und proinflammatorischen Faktoren wurde reduziert. Aus diesen Ergebnissen lässt sich die Schlussfolgerung ziehen, dass die Inhibierung der Mikroglia einen hemmenden Einfluss auf die choroidale Neovaskularisation hat.

Titel: Die Rolle der Mikroglia bei der Pathogenese der altersbedingten Makuladegeneration
Verfasser: Niekämper, Daniel GND
Gutachter: Heiduschka, Peter GND
Organisation: FB 13: Biologie
FB 05: Medizinische Fakultät
Dokumenttyp: Dissertation/Habilitation
Medientyp: Text
Erscheinungsdatum: 2015
Publikation in MIAMI: 22.02.2016
Datum der letzten Änderung: 22.02.2016
Schlagwörter: Mikroglia; CNV; AMD; Minocyclin; TKP
Fachgebiete: Biowissenschaften; Biologie
Sprache: Deutsch
Format: PDF-Dokument
URN: urn:nbn:de:hbz:6-96279459190
Permalink: https://nbn-resolving.org/urn:nbn:de:hbz:6-96279459190
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Inhalt:
I. Inhaltsverzeichnis……………………………………………………………....I
II. Abbildungsverzeichnis………………………………....………….…...…...IV
III. Tabellenverzeichnis…………………………...…………..……………........VI
IV. Abkürzungsverzeichnis……………………..………………………...........VII
1. Einleitung..............................................................................................................1
1.1. Altersbedingte Makuladegeneration..................................................................1
1.1.1. Anatomischer Überblick...........................................................................1
1.1.1.1. Die Makula................................................................................2
1.1.1.2. Die Retina.................................................................................2
1.1.2. Die Pathogenese der AMD......................................................................5
1.1.2.1. Geografische Atrophie..............................................................6
1.1.2.2. Choroidale Neovaskularisation.................................................8
1.1.3. Epidermiolgie...........................................................................................9
1.1.4. Risikofaktoren..........................................................................................9
1.1.5. Therapeutische Ansätze........................................................................10
1.2. Mikroglia..........................................................................................................12
1.2.1. Ursprung der Mikroglia..........................................................................13
1.2.2. Mikroglia in der Netzhaut.......................................................................15
1.2.3. Oberflächenmarker und Rezeptoren.....................................................17
1.2.4. „aktivierte“ Mikroglia...............................................................................19
1.2.5. Mikroglia und AMD................................................................................22
1.2.6. Modell der laserinduzierten CNV...........................................................23
2. Ziel der Arbeit.....................................................................................................24
3. Material................................................................................................................25
3.1. Geräte..............................................................................................................25
3.2. Verbrauchsmaterial..........................................................................................26
3.3. Chemikalien und Reagenzien..........................................................................26
3.4. Puffer und Lösungen.......................................................................................27
3.5. Kits...................................................................................................................27
3.6. Primer..............................................................................................................27
3.7. Antikörper........................................................................................................28
3.8. Computerprogramme.......................................................................................28
3.9. Versuchstiere...................................................................................................28
3.10. Wirkstoffe zur Inhibition der Mikroglia..............................................................29
3.10.1. Minocyclin............................................................................................29
3.10.2. TKP......................................................................................................29
3.10.3. RGDS..................................................................................................29
3.10.4. Cortisol.................................................................................................29
4. Methoden............................................................................................................30
4.1. Model der laserinduzierten choroidalen Neovaskularisation...........................30
4.2. Gruppierung und Behandlung..........................................................................30
4.3. in-vivo-Bildgebung...........................................................................................32
4.3.1. Infrarot-Scanning-Laser-Ophthalmoskopie............................................32
4.3.2. Fluoreszenzangiographie......................................................................32
4.4. Auswertungsmethode der in-vivo Bildgebung.................................................33
4.4.1. Statistische Auswertung........................................................................33
4.5. Retina-Präparation...........................................................................................34
4.6. RNA-Extraktion................................................................................................35
4.7. Photometrische Konzentrationsbestimmung der RNA....................................35
4.8. Reverse Transkription (cDNA-Synthese).........................................................36
4.9. RT-PCR...........................................................................................................36
4.10. Relative Quantifizierung……………….............................................................39
4.11. Next-Generation-Sequencing..........................................................................39
4.12. Paraffin-Histologie...........................................................................................40
4.12.1. Formalin-Fixierung...............................................................................40
4.12.2. Paraffineinbettung...............................................................................40
4.12.3. Schnitte-Anfertigung............................................................................41
4.13. Kryostat-Histologie...........................................................................................41
4.14. Immunhistologie...............................................................................................41
4.14.1. Immunhistochemie für Paraffinschnitte................................................41
4.14.1. Immunhistochemie für Kryoschnitte.....................................................42
5. Ergebnisse..........................................................................................................43
5.1. Migration der Mikroglia-Zellen nach der laserinduzierten CNV.......................43
5.2. Expression von proangiogenen Faktoren und puringergen Rezeptoren.........47
5.3. Modulation der Mikroglia-Migration..................................................................49
5.4. Modulation des Ausmaßes der Neovaskularisation.........................................53
5.5. Ergebnisse der RT-PCR..................................................................................56
5.6. Ergebnisse des Next-Generation-Sequencing................................................57
6. Diskussion..........................................................................................................59
7. Zusammenfassung/Summary...........................................................................66
8. Literaturverzeichnis...........................................................................................68
9. Anhang................................................................................................................84
9.1. Lebenslauf.......................................................................................................84
9.2. Danksagung.....................................................................................................85
9.3. Versicherung....................................................................................................86
9.4. Eidesstattliche Versicherung...........................................................................87