Vorkommen und Transkription des ToxB-Gens in enterohämorrhagischen Escherichia coli (EHEC) O157

EHEC besitzen eine Vielzahl von genetisch unterschiedlich lokalisierten Pathogenitätsfaktoren. Auf dem Plasmid pO157, welches nahezu in allen EHEC O157:H7 vorhanden ist, befindet sich ein Gen, welches für ToxB kodiert. ToxB ist für eine gesteigerte Erregeradhärenz verantwortlich. In dieser Arbeit wu...

Author: Rassi Warai, Gregor
Further contributors: Karch, Helge (Thesis advisor)
Division/Institute:FB 05: Medizinische Fakultät
Document types:Doctoral thesis
Media types:Text
Publication date:
Date of publication on miami:03.02.2014
Modification date:03.02.2014
Edition statement:[Electronic ed.]
Subjects:toxB; EHEC; O157:H7; Transkription; mRNA-Expression
DDC Subject:610: Medizin und Gesundheit
License:InC 1.0
Language:German
Format:PDF document
URN:urn:nbn:de:hbz:6-04339571635
Permalink:http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:hbz:6-04339571635
Digital documents:diss_rassi_warai.pdf
Table of contents:
  • ZUSAMMENFASSUNG ...................................................................................... I
  • INHALTSVERZEICHNIS ................................................................................... III
  • 1 EINLEITUNG ........................................................................................... 1
  • 1.1 Einleitung zu EHEC ................................................................................. 1
  • 1.2 Klinik ........................................................................................................ 3
  • 1.3 Therapie ................................................................................................... 3
  • 1.4 Pathophysiologie ..................................................................................... 4
  • 1.5 toxB im Plasmid pO157 ........................................................................... 5
  • 2 ZIELSETZUNG ........................................................................................ 6
  • 3 MATERIAL UND METHODEN ................................................................ 7
  • 3.1 Material .................................................................................................... 7
  • 3.1.1 Herkunft der verwendeten E. coli-Stämme 7
  • 3.1.2 Geräte 7
  • 3.1.3 Reagenzien und Verbrauchsmaterialien 8
  • 3.2 Methoden ............................................................................................... 10
  • 3.2.1 Nachweis des toxB mittels PCR 10
  • 3.2.2 Agarose-Gelelektrophorese 11
  • 3.2.3 Verfahren zur RNA-Gewinnung 11
  • 3.2.4 Optimierung der Primerkonzentration und der Templatemenge 16
  • 3.2.5 One-Step Real-Time RT-PCR zur quantitativen Ermittlung der toxB-Transkription
  • 3.2.6 One-Step Real-time RT-PCR Datenanalyse 20
  • 4 ERGEBNISSE ....................................................................................... 22
  • 4.1 PCR Nachweis von toxB in Stx-produzierenden E. coli O157:H7 und SF O157:H- ................................................................................................. 22
  • 4.2 Kontrolle der RNA-Proben auf DNA-Kontamination mittels Real-Time PCR ....................................................................................................... 23
  • 4.3 Schmelzkurvenanalyse .......................................................................... 24
  • 4.4 Optimierung der Primerkonzentration und der Templatemenge ............ 25
  • 4.5 One-Step Real-Time RT-PCR zur quantitativen Ermittlung der mRNA-Expression von toxB bei verschiedenen pH-Werten und konstanter Temperatur von 22°C bei EDL933 ......................................................... 26
  • 4.6 One-Step Real-Time RT-PCR zur quantitativen Ermittlung der mRNA-Expression von toxB bei verschiedenen pH-Werten und konstanter Temperatur von 30°C bei EDL933 ......................................................... 28
  • 4.7 One-Step Real-Time RT-PCR zur quantitativen Ermittlung der mRNA-Expression von toxB bei verschiedenen pH-Werten und konstanter Temperatur von 37°C bei EDL933 ......................................................... 30
  • 5 DISKUSSION ........................................................................................ 32
  • 6 LITERATURVERZEICHNIS .................................................................. 36
  • 7 ANHANG ............................................................................................... 42
  • 7.1 Abkürzungsverzeichnis .......................................................................... 42
  • 7.2 Abbildungsverzeichnis ........................................................................... 43
  • 7.3 Tabellenverzeichnis ............................................................................... 44.