Vorkommen und Transkription des ToxB-Gens in enterohämorrhagischen Escherichia coli (EHEC) O157

EHEC besitzen eine Vielzahl von genetisch unterschiedlich lokalisierten Pathogenitätsfaktoren. Auf dem Plasmid pO157, welches nahezu in allen EHEC O157:H7 vorhanden ist, befindet sich ein Gen, welches für ToxB kodiert. ToxB ist für eine gesteigerte Erregeradhärenz verantwortlich. In dieser Arbeit wu...

Author: Rassi Warai, Gregor
Further contributors: Karch, Helge (Thesis advisor)
Division/Institute:FB 05: Medizinische Fakultät
Document types:Doctoral thesis
Media types:Text
Publication date:
Date of publication on miami:03.02.2014
Modification date:03.02.2014
Edition statement:[Electronic ed.]
Subjects:toxB; EHEC; O157:H7; Transkription; mRNA-Expression
DDC Subject:610: Medizin und Gesundheit
License:InC 1.0
Language:German
Format:PDF document
URN:urn:nbn:de:hbz:6-04339571635
Permalink:http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:hbz:6-04339571635
Digital documents:diss_rassi_warai.pdf
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505 0 |a ZUSAMMENFASSUNG ...................................................................................... I -- INHALTSVERZEICHNIS ................................................................................... III -- 1 EINLEITUNG ........................................................................................... 1 -- 1.1 Einleitung zu EHEC ................................................................................. 1 -- 1.2 Klinik ........................................................................................................ 3 -- 1.3 Therapie ................................................................................................... 3 -- 1.4 Pathophysiologie ..................................................................................... 4 -- 1.5 toxB im Plasmid pO157 ........................................................................... 5 -- 2 ZIELSETZUNG ........................................................................................ 6 -- 3 MATERIAL UND METHODEN ................................................................ 7 -- 3.1 Material .................................................................................................... 7 -- 3.1.1 Herkunft der verwendeten E. coli-Stämme 7 -- 3.1.2 Geräte 7 -- 3.1.3 Reagenzien und Verbrauchsmaterialien 8 -- 3.2 Methoden ............................................................................................... 10 -- 3.2.1 Nachweis des toxB mittels PCR 10 -- 3.2.2 Agarose-Gelelektrophorese 11 -- 3.2.3 Verfahren zur RNA-Gewinnung 11 -- 3.2.4 Optimierung der Primerkonzentration und der Templatemenge 16 -- 3.2.5 One-Step Real-Time RT-PCR zur quantitativen Ermittlung der toxB-Transkription -- 3.2.6 One-Step Real-time RT-PCR Datenanalyse 20 -- 4 ERGEBNISSE ....................................................................................... 22 -- 4.1 PCR Nachweis von toxB in Stx-produzierenden E. coli O157:H7 und SF O157:H- ................................................................................................. 22 -- 4.2 Kontrolle der RNA-Proben auf DNA-Kontamination mittels Real-Time PCR ....................................................................................................... 23 -- 4.3 Schmelzkurvenanalyse .......................................................................... 24 -- 4.4 Optimierung der Primerkonzentration und der Templatemenge ............ 25 -- 4.5 One-Step Real-Time RT-PCR zur quantitativen Ermittlung der mRNA-Expression von toxB bei verschiedenen pH-Werten und konstanter Temperatur von 22°C bei EDL933 ......................................................... 26 -- 4.6 One-Step Real-Time RT-PCR zur quantitativen Ermittlung der mRNA-Expression von toxB bei verschiedenen pH-Werten und konstanter Temperatur von 30°C bei EDL933 ......................................................... 28 -- 4.7 One-Step Real-Time RT-PCR zur quantitativen Ermittlung der mRNA-Expression von toxB bei verschiedenen pH-Werten und konstanter Temperatur von 37°C bei EDL933 ......................................................... 30 -- 5 DISKUSSION ........................................................................................ 32 -- 6 LITERATURVERZEICHNIS .................................................................. 36 -- 7 ANHANG ............................................................................................... 42 -- 7.1 Abkürzungsverzeichnis .......................................................................... 42 -- 7.2 Abbildungsverzeichnis ........................................................................... 43 -- 7.3 Tabellenverzeichnis ............................................................................... 44. 
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520 3 |a EHEC besitzen eine Vielzahl von genetisch unterschiedlich lokalisierten Pathogenitätsfaktoren. Auf dem Plasmid pO157, welches nahezu in allen EHEC O157:H7 vorhanden ist, befindet sich ein Gen, welches für ToxB kodiert. ToxB ist für eine gesteigerte Erregeradhärenz verantwortlich. In dieser Arbeit wurde toxB mittels PCR in allen EHEC O157:H7 (n=18), nicht aber in Sorbitol-fermentierenden (SF) O157:H- (n=17) nachgewiesen. Anschließend wurde durch eine Schmelzkurvenanalyse die charakteristische Schmelztemperatur von 74,3°C für toxB PCR-Produkte ermittelt. Es konnte gezeigt werden, dass die Transkription von toxB temperatur- und pH-Wert-abhängig ist. Die höchste Expression erfolgte bei einem pH-Wert von 8,3 und einer Temperatur von 37°C. Im Vergleich hierzu war die mRNA-Expression des toxB im sauren Milieu bei 30°C erniedrigt. Ob die gesteigerte Transkription des toxB auch zu einer gesteigerten Adhärenz führt, muss untersucht werden.<br/><br/> 
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