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Einfluss von Alloantigenen und deren Expressionsmuster auf den GvT-Effekt im Rahmen einer allogenen Stammzelltransplantation

Einleitung: Mit einer GvHD ist ein Graft-versus-Tumor-Effekt assoziiert, der zu einer geringeren Rezidivrate beitragen kann. Ziel war es, den Effekt von Alloantigenen auf den GvT-Effekt, insbesondere der Einfluss der Expression (ubiquitŠr vs. exklusiv auf dem Tumor), zu charakterisieren.Material und Methoden: Es wurde ein murines haploidentes parent-into-F1-Transplantationsmodell verwendet (BALB/c (H-2Kd) --> F1[BALB/cxCBA/J] (H-2Kdxk)). Als Modelltumor wurde das aus BALB/c stammende Lymphom MPC-11 (H-2Kd) gewŠhlt, welches mit den MHC-Alloantigenen H-2Kk bzw. H-2Kb transfiziert wurde.Ergebnisse: Die zusŠtzlichen Alloantigene fŸhrten zu einem verstŠrkten GvT-Effekt, bei H-2Kk jedoch nur kurz nach der Transplantation. Im Falle von H-2Kb machte er sich durch den Verlust des exklusiven Alloantigens bemerkbar. Es wurden spezifische T-Zellen gegen H-2Kb nachgewiesen. Diskussion: MHC-Alloantigene haben einen Einfluss auf den GvT-Effekt, vor allem bei exklusiver Expression auf dem Tumor.

Titel: Einfluss von Alloantigenen und deren Expressionsmuster auf den GvT-Effekt im Rahmen einer allogenen Stammzelltransplantation
Verfasser: Urh, Jennifer GND
Gutachter: Stelljes, Matthias GND
Organisation: FB 05: Medizinische Fakultät
Dokumenttyp: Dissertation/Habilitation
Medientyp: Text
Erscheinungsdatum: 2015
Publikation in MIAMI: 21.07.2015
Datum der letzten Änderung: 21.07.2015
Schlagwörter: GvHD; GvT-Effekt; Alloantigen; allogene Stammzelltransplantation; MHC
Fachgebiete: Medizin und Gesundheit
Sprache: Deutsch
Format: PDF-Dokument
URN: urn:nbn:de:hbz:6-68299664171
Permalink: https://nbn-resolving.org/urn:nbn:de:hbz:6-68299664171
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Inhalt:
1 Einleitung ..................................................................................................... 1
1.1 Hämatopoetische Stammzelltransplantation ................................................. 1
1.1.1 Arten der SZT ............................................................................................... 1
1.1.2 Stammzellpräparation ................................................................................... 2
1.1.3 Konditionierungstherapie .............................................................................. 3
1.1.4 Indikation ...................................................................................................... 4
1.2 Komplikationen/Immunreaktionen nach SZT ................................................ 5
1.2.1 Graft-versus-Host Disease ........................................................................... 5
1.2.2 Pathophysiologie der akuten GvHD ............................................................. 6
1.2.3 Host-versus-Graft-Reaktion .......................................................................... 8
1.2.4 Graft-versus-Tumor-Effekt ............................................................................ 9
1.3 Molekulare Grundlagen der Immunreaktionen ............................................ 10
1.3.1 Haupt-Histokompatibilitäts-Komplexe ......................................................... 10
1.3.2 Minor-Histokompatibilitätsantigene ............................................................. 11
1.3.3 Tumorantigene ........................................................................................... 12
1.4 Fragestellung der Arbeit ................................................................................ 14
2 Material und Methoden ............................................................................. 15
2.1 Tierexperimentelle Methoden ........................................................................ 16
2.1.1 Mäuse ......................................................................................................... 16
2.1.2 Präparation von Milzzellen ......................................................................... 17
2.1.3 Präparation von Knochenmarkstammzellen ............................................... 17
2.1.4 Tumorzellapplikation ................................................................................... 18
2.1.5 Transplantation der Mäuse ......................................................................... 18
2.1.6 Monitoring der Tiere ................................................................................... 19
2.2 Zellkultur ......................................................................................................... 20
2.2.1 Kultivierung muriner Tumorzelllinien .......................................................... 20
2.2.2 Auftauen von Zellen .................................................................................... 20
2.2.3 Einfrieren von Zellen ................................................................................... 21
2.2.4 Zählung von Zellen ..................................................................................... 21
2.2.5 ELISpot ....................................................................................................... 21
2.2.6 Bestrahlung von Tumorzellen ..................................................................... 22
2.3 Transfektionen ................................................................................................ 22
2.3.1 Vektor pcDNA-UTY-GFP#62 und pcDNA3.1-GFP ..................................... 22
2.3.2 Elektroporation ........................................................................................... 23
2.3.3 Nanofectin .................................................................................................. 23
2.3.4 Magnetofection ....................................................................................... 24
2.3.5 DreamFect Gold ...................................................................................... 25
2.3.6 Testen der Zellen und Subklonierung ......................................................... 26
2.4 Durchflusszytometrie ..................................................................................... 26
2.4.1 Grundlagen ................................................................................................. 26
2.4.2 Antikörper ................................................................................................... 27
2.4.3 Vorbereitung der ex vivo Tumoren für die Durchflusszytometrie ................ 27
2.4.4 Antikörperfärbung von Tumorzellen und Milzzellen .................................... 28
2.5 Statistische Auswertungsverfahren ............................................................. 29
2.5.1 Bestimmung der Standardabweichung und des SEM ................................ 29
2.5.2 Bestimmung der Signifikanz ....................................................................... 29
2.6 Transplantationsmodell ................................................................................. 29
3 Ergebnisse ................................................................................................. 31
3.1 Transfektionen von UTY in LLC .................................................................... 31
3.2 Vorversuche .................................................................................................... 33
3.2.1 Wachstumskinetik und Stabilität von MPC-11-H-2Kk ................................. 33
3.2.2 Immunogenität von MPC-11-H-2Kk ............................................................ 34
3.2.3 Immunogenität von MPC-11-H-2Kb ............................................................ 36
3.3 Tumorwachstum nach syngener Transplantation (BALB/c!BALB/c) ...... 38
3.4 Allogene Transplantationen BALB/c!F1[BALB/cxCBA/J] ........................ 40
3.4.1 GvT-Reaktionen gegen das ubiquitär exprimierte Alloantigen H-2Kk ......... 40
3.4.2 Stabilität des mit H-2Kk transfizierten Tumors im
BALB/c!F1[BALB/cxCBA/J]-Transplantationsmodell ................................ 52
3.4.3 GvT-Reaktionen gegen das exklusiv auf dem Tumor exprimierte
Alloantigen H-2Kb ....................................................................................... 54
3.4.4 Nachweis von spezifischen T-Zellen gegen das Alloantigen H-2Kb mittels
ELISpot ....................................................................................................... 61
3.4.5 Chimärismus der transplantierten Tiere ..................................................... 63
4 Diskussion ................................................................................................. 65
5 Literaturverzeichnis .................................................................................. 75
6 Lebenslauf .................................................................................................. 87
7 Danksagung ............................................................................................... 89
8 Anlagen ......................................................................................................... I