Rolle des Heparansulfat-Proteoglykans Syndecan-1 bei der Strahlenresistenz des Mammakarzinoms
In einer Studie konnte eine erhöhte Radioresistenz von triple-negativen Brustkrebszellen bei siRNA-vermittelter Herabregulation von Syndecan-1 (Sdc-1) festgestellt werden. Dieses Phänomen wurde in dieser Arbeit genauer charakterisiert. Hierzu wurden funktionelle Untersuchungen und Analysen der Expre...
Verfasser: | |
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Weitere Beteiligte: | |
Dokumenttypen: | Dissertation/Habilitation |
Medientypen: | Text |
Erscheinungsdatum: | 2018 |
Publikation in MIAMI: | 07.11.2018 |
Datum der letzten Änderung: | 07.11.2018 |
Angaben zur Ausgabe: | [Electronic ed.] |
Schlagwörter: | Syndecan-1; Mammakarzinom; Strahlenresistenz; Brustkrebs; Heparansulfat-Proteoglykan; Bestrahlung; Strahlentherapie |
Fachgebiet (DDC): | 610: Medizin und Gesundheit |
Lizenz: | InC 1.0 |
Sprache: | Deutsch |
Format: | PDF-Dokument |
URN: | urn:nbn:de:hbz:6-96189623776 |
Permalink: | https://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:hbz:6-96189623776 |
Onlinezugriff: | diss_rottke.pdf |
Inhaltsverzeichnis:
- ZUSAMMENFASSUNG ....................................................................................................................................................... 3
- 1 Erklärung ..................................................................................................................................................................... 4
- Inhaltsverzeichnis .............................................................................................................................................................. 6
- Abkürzungsverzeichnis ................................................................................................................................................... 9
- Maßeinheiten .................................................................................................................................................................... 12
- 2 Einleitung .................................................................................................................................................................. 13
- 2.1 Das Mammakarzinom ................................................................................................................................ 13
- 2.1.1 Definition ............................................................................................................................................... 13
- 2.1.2 Epidemiologie ...................................................................................................................................... 13
- 2.1.3 Diagnose................................................................................................................................................. 14
- 2.1.4 Klinische Symptome ......................................................................................................................... 14
- 2.1.5 Bewertung/Charakterisierung ..................................................................................................... 14
- 2.1.6 Therapie ................................................................................................................................................. 15
- 2.2 Syndecan-1 ..................................................................................................................................................... 16
- 2.2.1 Definition ............................................................................................................................................... 16
- 2.2.2 Aufbau und Funktionen ................................................................................................................... 16
- 2.3 Zellkulturmodelle ........................................................................................................................................ 19
- 2.3.1 MDA-MB-468 ....................................................................................................................................... 19
- 2.3.2 MCF-7 ...................................................................................................................................................... 19
- 2.4 Fragestellung ................................................................................................................................................. 20
- 3 Material und Methoden ...................................................................................................................................... 21
- 3.1 Zellkultur ......................................................................................................................................................... 21
- 3.1.1 Ablösen und Zählen der Zellen ..................................................................................................... 21
- 3.2 Transfektion mit siRNA ............................................................................................................................. 23
- 3.2.1 siRNA Details ....................................................................................................................................... 24
- 3.3 Quantitative Real-Time-PCR ................................................................................................................... 25
- 3.3.1 RNA-Isolierung .................................................................................................................................... 25
- 3.3.2 Photometrische Konzentrationsbestimmung ........................................................................ 25
- 3.3.3 Umschreiben der RNA in cDNA .................................................................................................... 26
- 3.3.4 Quantitative Real-Time-PCR Protokoll 1 .................................................................................. 26
- 3.3.5 Gradienten-PCR .................................................................................................................................. 28
- 3.3.6 Primer ..................................................................................................................................................... 29
- 3.3.7 Quantitative Real-Time-PCR – Protokoll 2 .............................................................................. 35
- 3.4 Gelelektrophorese ....................................................................................................................................... 37
- 3.5 γH2AX-Test .................................................................................................................................................... 39
- 3.6 Zellzyklus-Analyse mittels DAPI-Färbung ......................................................................................... 42
- 3.7 BrdU-Assay ..................................................................................................................................................... 43
- 3.8 Statistik ............................................................................................................................................................ 46
- 3.9 Materialliste ................................................................................................................................................... 47
- 4 Ergebnisse ................................................................................................................................................................ 55
- 4.1 Überprüfung des Syndecan-1-Knockdowns mittels qPCR ......................................................... 55
- 4.2 Einfluss von Syndecan-1 auf Signalprozesse.................................................................................... 57
- 4.2.1 qPCR Endothelin-1 ............................................................................................................................ 57
- 4.3 Einfluss von Syndecan-1 auf die Zellproliferation bei Bestrahlung ....................................... 60
- 4.3.1 Funktionelles Assay: BrdU ............................................................................................................. 60
- 4.3.2 qPCR ........................................................................................................................................................ 61
- 4.3.2.1 Cyclin A1 ........................................................................................................................................... 61
- 4.3.2.2 Cyclin B1 ........................................................................................................................................... 62
- 4.3.2.3 Cyclin-dependent Kinase 6 ........................................................................................................ 63
- 4.4 Reparaturprozesse nach Bestrahlung ................................................................................................. 65
- 4.4.1 γH2AX-Assay ........................................................................................................................................ 65
- 4.4.2 qPCRs ...................................................................................................................................................... 66
- 4.4.2.1 EXO1 ................................................................................................................................................... 66
- 4.4.2.2 CREB1................................................................................................................................................. 68
- 4.4.2.3 PMS1 ................................................................................................................................................... 70
- 4.5 Einfluss des Syndecan-1 Knockdowns auf den Zellzyklus .......................................................... 72
- 4.5.1 Zellzyklus-Analyse ............................................................................................................................. 72
- 4.5.2 qPCR Zellzyklus-Gene ....................................................................................................................... 74
- 5 Diskussion ................................................................................................................................................................ 75
- 5.1 Endothelin 1 Signalweg ............................................................................................................................. 75
- 5.2 Zellzyklus und DNA-Reparatur .............................................................................................................. 78
- 5.2.1 CDK6 ........................................................................................................................................................ 78
- 5.2.2 CREB1 ..................................................................................................................................................... 79
- 5.2.3 EXO1 ........................................................................................................................................................ 81
- 5.2.4 PMS1 ........................................................................................................................................................ 82
- 5.3 Zusammenfassung ....................................................................................................................................... 83
- 5.4 Limitierungen der Studie ......................................................................................................................... 85
- 5.5 Ausblick ........................................................................................................................................................... 87
- 6 Literaturverzeichnis ............................................................................................................................................. 88
- 7 Abbildungsverzeichnis ........................................................................................................................................ 99
- 8 Tabellenverzeichnis .......................................................................................................................................... 101
- 10 Lebenslauf ........................................................................................................................................................ 103
- 11 Danksagung ...................................................................................................................................................... 105
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