Rolle des Heparansulfat-Proteoglykans Syndecan-1 bei der Strahlenresistenz des Mammakarzinoms

In einer Studie konnte eine erhöhte Radioresistenz von triple-negativen Brustkrebszellen bei siRNA-vermittelter Herabregulation von Syndecan-1 (Sdc-1) festgestellt werden. Dieses Phänomen wurde in dieser Arbeit genauer charakterisiert. Hierzu wurden funktionelle Untersuchungen und Analysen der Expre...

Verfasser: Rottke, Theresa Viktoria
Weitere Beteiligte: Götte, Martin (Gutachter)
Dokumenttypen:Dissertation/Habilitation
Medientypen:Text
Erscheinungsdatum:2018
Publikation in MIAMI:07.11.2018
Datum der letzten Änderung:07.11.2018
Angaben zur Ausgabe:[Electronic ed.]
Schlagwörter:Syndecan-1; Mammakarzinom; Strahlenresistenz; Brustkrebs; Heparansulfat-Proteoglykan; Bestrahlung; Strahlentherapie
Fachgebiet (DDC):610: Medizin und Gesundheit
Lizenz:InC 1.0
Sprache:Deutsch
Format:PDF-Dokument
URN:urn:nbn:de:hbz:6-96189623776
Permalink:https://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:hbz:6-96189623776
Onlinezugriff:diss_rottke.pdf
Inhaltsverzeichnis:
  • ZUSAMMENFASSUNG ....................................................................................................................................................... 3
  • 1 Erklärung ..................................................................................................................................................................... 4
  • Inhaltsverzeichnis .............................................................................................................................................................. 6
  • Abkürzungsverzeichnis ................................................................................................................................................... 9
  • Maßeinheiten .................................................................................................................................................................... 12
  • 2 Einleitung .................................................................................................................................................................. 13
  • 2.1 Das Mammakarzinom ................................................................................................................................ 13
  • 2.1.1 Definition ............................................................................................................................................... 13
  • 2.1.2 Epidemiologie ...................................................................................................................................... 13
  • 2.1.3 Diagnose................................................................................................................................................. 14
  • 2.1.4 Klinische Symptome ......................................................................................................................... 14
  • 2.1.5 Bewertung/Charakterisierung ..................................................................................................... 14
  • 2.1.6 Therapie ................................................................................................................................................. 15
  • 2.2 Syndecan-1 ..................................................................................................................................................... 16
  • 2.2.1 Definition ............................................................................................................................................... 16
  • 2.2.2 Aufbau und Funktionen ................................................................................................................... 16
  • 2.3 Zellkulturmodelle ........................................................................................................................................ 19
  • 2.3.1 MDA-MB-468 ....................................................................................................................................... 19
  • 2.3.2 MCF-7 ...................................................................................................................................................... 19
  • 2.4 Fragestellung ................................................................................................................................................. 20
  • 3 Material und Methoden ...................................................................................................................................... 21
  • 3.1 Zellkultur ......................................................................................................................................................... 21
  • 3.1.1 Ablösen und Zählen der Zellen ..................................................................................................... 21
  • 3.2 Transfektion mit siRNA ............................................................................................................................. 23
  • 3.2.1 siRNA Details ....................................................................................................................................... 24
  • 3.3 Quantitative Real-Time-PCR ................................................................................................................... 25
  • 3.3.1 RNA-Isolierung .................................................................................................................................... 25
  • 3.3.2 Photometrische Konzentrationsbestimmung ........................................................................ 25
  • 3.3.3 Umschreiben der RNA in cDNA .................................................................................................... 26
  • 3.3.4 Quantitative Real-Time-PCR Protokoll 1 .................................................................................. 26
  • 3.3.5 Gradienten-PCR .................................................................................................................................. 28
  • 3.3.6 Primer ..................................................................................................................................................... 29
  • 3.3.7 Quantitative Real-Time-PCR – Protokoll 2 .............................................................................. 35
  • 3.4 Gelelektrophorese ....................................................................................................................................... 37
  • 3.5 γH2AX-Test .................................................................................................................................................... 39
  • 3.6 Zellzyklus-Analyse mittels DAPI-Färbung ......................................................................................... 42
  • 3.7 BrdU-Assay ..................................................................................................................................................... 43
  • 3.8 Statistik ............................................................................................................................................................ 46
  • 3.9 Materialliste ................................................................................................................................................... 47
  • 4 Ergebnisse ................................................................................................................................................................ 55
  • 4.1 Überprüfung des Syndecan-1-Knockdowns mittels qPCR ......................................................... 55
  • 4.2 Einfluss von Syndecan-1 auf Signalprozesse.................................................................................... 57
  • 4.2.1 qPCR Endothelin-1 ............................................................................................................................ 57
  • 4.3 Einfluss von Syndecan-1 auf die Zellproliferation bei Bestrahlung ....................................... 60
  • 4.3.1 Funktionelles Assay: BrdU ............................................................................................................. 60
  • 4.3.2 qPCR ........................................................................................................................................................ 61
  • 4.3.2.1 Cyclin A1 ........................................................................................................................................... 61
  • 4.3.2.2 Cyclin B1 ........................................................................................................................................... 62
  • 4.3.2.3 Cyclin-dependent Kinase 6 ........................................................................................................ 63
  • 4.4 Reparaturprozesse nach Bestrahlung ................................................................................................. 65
  • 4.4.1 γH2AX-Assay ........................................................................................................................................ 65
  • 4.4.2 qPCRs ...................................................................................................................................................... 66
  • 4.4.2.1 EXO1 ................................................................................................................................................... 66
  • 4.4.2.2 CREB1................................................................................................................................................. 68
  • 4.4.2.3 PMS1 ................................................................................................................................................... 70
  • 4.5 Einfluss des Syndecan-1 Knockdowns auf den Zellzyklus .......................................................... 72
  • 4.5.1 Zellzyklus-Analyse ............................................................................................................................. 72
  • 4.5.2 qPCR Zellzyklus-Gene ....................................................................................................................... 74
  • 5 Diskussion ................................................................................................................................................................ 75
  • 5.1 Endothelin 1 Signalweg ............................................................................................................................. 75
  • 5.2 Zellzyklus und DNA-Reparatur .............................................................................................................. 78
  • 5.2.1 CDK6 ........................................................................................................................................................ 78
  • 5.2.2 CREB1 ..................................................................................................................................................... 79
  • 5.2.3 EXO1 ........................................................................................................................................................ 81
  • 5.2.4 PMS1 ........................................................................................................................................................ 82
  • 5.3 Zusammenfassung ....................................................................................................................................... 83
  • 5.4 Limitierungen der Studie ......................................................................................................................... 85
  • 5.5 Ausblick ........................................................................................................................................................... 87
  • 6 Literaturverzeichnis ............................................................................................................................................. 88
  • 7 Abbildungsverzeichnis ........................................................................................................................................ 99
  • 8 Tabellenverzeichnis .......................................................................................................................................... 101
  • 10 Lebenslauf ........................................................................................................................................................ 103
  • 11 Danksagung ...................................................................................................................................................... 105
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