Rolle des Heparansulfat-Proteoglykans Syndecan-1 bei der Strahlenresistenz des Mammakarzinoms

In einer Studie konnte eine erhöhte Radioresistenz von triple-negativen Brustkrebszellen bei siRNA-vermittelter Herabregulation von Syndecan-1 (Sdc-1) festgestellt werden. Dieses Phänomen wurde in dieser Arbeit genauer charakterisiert. Hierzu wurden funktionelle Untersuchungen und Analysen der Expre...

Verfasser: Rottke, Theresa Viktoria
Weitere Beteiligte: Götte, Martin (Gutachter)
Dokumenttypen:Dissertation/Habilitation
Medientypen:Text
Erscheinungsdatum:2018
Publikation in MIAMI:07.11.2018
Datum der letzten Änderung:07.11.2018
Angaben zur Ausgabe:[Electronic ed.]
Schlagwörter:Syndecan-1; Mammakarzinom; Strahlenresistenz; Brustkrebs; Heparansulfat-Proteoglykan; Bestrahlung; Strahlentherapie
Fachgebiet (DDC):610: Medizin und Gesundheit
Lizenz:InC 1.0
Sprache:Deutsch
Format:PDF-Dokument
URN:urn:nbn:de:hbz:6-96189623776
Permalink:https://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:hbz:6-96189623776
Onlinezugriff:diss_rottke.pdf
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505 0 |a ZUSAMMENFASSUNG ....................................................................................................................................................... 3 -- 1 Erklärung ..................................................................................................................................................................... 4 -- Inhaltsverzeichnis .............................................................................................................................................................. 6 -- Abkürzungsverzeichnis ................................................................................................................................................... 9 -- Maßeinheiten .................................................................................................................................................................... 12 -- 2 Einleitung .................................................................................................................................................................. 13 -- 2.1 Das Mammakarzinom ................................................................................................................................ 13 -- 2.1.1 Definition ............................................................................................................................................... 13 -- 2.1.2 Epidemiologie ...................................................................................................................................... 13 -- 2.1.3 Diagnose................................................................................................................................................. 14 -- 2.1.4 Klinische Symptome ......................................................................................................................... 14 -- 2.1.5 Bewertung/Charakterisierung ..................................................................................................... 14 -- 2.1.6 Therapie ................................................................................................................................................. 15 -- 2.2 Syndecan-1 ..................................................................................................................................................... 16 -- 2.2.1 Definition ............................................................................................................................................... 16 -- 2.2.2 Aufbau und Funktionen ................................................................................................................... 16 -- 2.3 Zellkulturmodelle ........................................................................................................................................ 19 -- 2.3.1 MDA-MB-468 ....................................................................................................................................... 19 -- 2.3.2 MCF-7 ...................................................................................................................................................... 19 -- 2.4 Fragestellung ................................................................................................................................................. 20 -- 3 Material und Methoden ...................................................................................................................................... 21 -- 3.1 Zellkultur ......................................................................................................................................................... 21 -- 3.1.1 Ablösen und Zählen der Zellen ..................................................................................................... 21 -- 3.2 Transfektion mit siRNA ............................................................................................................................. 23 -- 3.2.1 siRNA Details ....................................................................................................................................... 24 -- 3.3 Quantitative Real-Time-PCR ................................................................................................................... 25 -- 3.3.1 RNA-Isolierung .................................................................................................................................... 25 -- 3.3.2 Photometrische Konzentrationsbestimmung ........................................................................ 25 -- 3.3.3 Umschreiben der RNA in cDNA .................................................................................................... 26 -- 3.3.4 Quantitative Real-Time-PCR Protokoll 1 .................................................................................. 26 -- 3.3.5 Gradienten-PCR .................................................................................................................................. 28 -- 3.3.6 Primer ..................................................................................................................................................... 29 -- 3.3.7 Quantitative Real-Time-PCR – Protokoll 2 .............................................................................. 35 -- 3.4 Gelelektrophorese ....................................................................................................................................... 37 -- 3.5 γH2AX-Test .................................................................................................................................................... 39 -- 3.6 Zellzyklus-Analyse mittels DAPI-Färbung ......................................................................................... 42 -- 3.7 BrdU-Assay ..................................................................................................................................................... 43 -- 3.8 Statistik ............................................................................................................................................................ 46 -- 3.9 Materialliste ................................................................................................................................................... 47 -- 4 Ergebnisse ................................................................................................................................................................ 55 -- 4.1 Überprüfung des Syndecan-1-Knockdowns mittels qPCR ......................................................... 55 -- 4.2 Einfluss von Syndecan-1 auf Signalprozesse.................................................................................... 57 -- 4.2.1 qPCR Endothelin-1 ............................................................................................................................ 57 -- 4.3 Einfluss von Syndecan-1 auf die Zellproliferation bei Bestrahlung ....................................... 60 -- 4.3.1 Funktionelles Assay: BrdU ............................................................................................................. 60 -- 4.3.2 qPCR ........................................................................................................................................................ 61 -- 4.3.2.1 Cyclin A1 ........................................................................................................................................... 61 -- 4.3.2.2 Cyclin B1 ........................................................................................................................................... 62 -- 4.3.2.3 Cyclin-dependent Kinase 6 ........................................................................................................ 63 -- 4.4 Reparaturprozesse nach Bestrahlung ................................................................................................. 65 -- 4.4.1 γH2AX-Assay ........................................................................................................................................ 65 -- 4.4.2 qPCRs ...................................................................................................................................................... 66 -- 4.4.2.1 EXO1 ................................................................................................................................................... 66 -- 4.4.2.2 CREB1................................................................................................................................................. 68 -- 4.4.2.3 PMS1 ................................................................................................................................................... 70 -- 4.5 Einfluss des Syndecan-1 Knockdowns auf den Zellzyklus .......................................................... 72 -- 4.5.1 Zellzyklus-Analyse ............................................................................................................................. 72 -- 4.5.2 qPCR Zellzyklus-Gene ....................................................................................................................... 74 -- 5 Diskussion ................................................................................................................................................................ 75 -- 5.1 Endothelin 1 Signalweg ............................................................................................................................. 75 -- 5.2 Zellzyklus und DNA-Reparatur .............................................................................................................. 78 -- 5.2.1 CDK6 ........................................................................................................................................................ 78 -- 5.2.2 CREB1 .............................................................................................. 
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520 3 |a <p>In einer Studie konnte eine erhöhte Radioresistenz von triple-negativen Brustkrebszellen bei siRNA-vermittelter Herabregulation von Syndecan-1 (Sdc-1) festgestellt werden. Dieses Phänomen wurde in dieser Arbeit genauer charakterisiert. Hierzu wurden funktionelle Untersuchungen und Analysen der Expression bestimmter Zielgene an bestrahlten und Sdc-1 defizitären triple-negativen und auch Rezeptor+ Brustkrebszellen durchgeführt. Besonders bei der triple-negativen Brustkrebszelllinie wurde der fehlende Einfluss des Sdc-1 bemerkbar, in Form von verzögerter DNA-Reparatur, arretiertem Zellzyklus und Veränderungen in der Genexpression von ET1, EXO1, CDK6 und CREB1. CDK6 könnte für die erhöhte Strahlenresistenz Sdc-1-defizitärer Zellen verantwortlich sein, da es den Zellzyklus in der G1 Phase arretiert, in welcher die Zelle resistenter gegen genotoxische Einflüsse ist. Möglicherweise interagiert Sdc-1 mit dem G-Protein des CREB1 Signalweges und beeinflusst so die Genexpression der o. g. Gene.</p> 
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