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Effekt von Acetylsalicylsäure auf die Vitalität, Proliferation und Differenzierung von primären Oligodendrozytenprogenitorzellen in vitro

Der Wnt/ß-Catenin-Signalweg spielt in der Entwicklung und Differenzierung verschiedener Zellarten eine große Rolle. Unter anderem hat er Einfluss auf die Reifung von Oligodendrozytenvorläuferzellen (OPCs). Ein aberranter Signalweg behindert im Verlauf der Multiplen Sklerose die Remyelinisierung; vermutlich durch eine Differenzierungshemmung der OPCs. Es konnte gezeigt werden, dass Acetylsalicylsäure (ASS) den Wnt/ß-Catenin-Signalweg in vitro hemmen kann. Unter einer Hemmung des Signalwegs wurde eine Differenzierungssteigerung von OPCs beobachtet. Folglich stellt sich die Frage, ob Aspirin eine Steigerung der Differenzierung von OPCs bewirken kann. In der vorliegenden Arbeit wurden primäre Maus-OPCs mit ASS behandelt. Die Reifung wurde auf Gen-, Protein- und morphologischer Ebene dargestellt und beurteilt. Unter 5 mM ASS konnte nach 48 Stunden eine signifikante Differenzierungshemmung beobachtet werden. Die erwartete Differenzierungssteigerung wurde nicht beobachtet.

Titel: Effekt von Acetylsalicylsäure auf die Vitalität, Proliferation und Differenzierung von primären Oligodendrozytenprogenitorzellen in vitro
Verfasser: Lilienbeck, Johanna GND
Gutachter: Kuhlmann, Tanja GND
Organisation: FB 05: Medizinische Fakultät
Dokumenttyp: Dissertation/Habilitation
Medientyp: Text
Erscheinungsdatum: 2016
Publikation in MIAMI: 28.11.2016
Datum der letzten Änderung: 28.11.2016
Schlagwörter: Multiple Sklerose; Acetylsalicylsäure; Wnt/ß-Catenin-Signalweg; Oligodendrozyt; Remyelinisierung
Fachgebiete: Medizin und Gesundheit
Sprache: Deutsch
Format: PDF-Dokument
URN: urn:nbn:de:hbz:6-93299674081
Permalink: https://nbn-resolving.org/urn:nbn:de:hbz:6-93299674081
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Inhalt:
Abkürzungsverzeichnis ................................................................................................ 1
1. Einleitung ................................................................................................................. 7
1.1 Multiple Sklerose ............................................................................................... 7
1.1.1 Epidemiologie ................................................................................................ 7
1.1.2 Ätiologie .......................................................................................................... 8
1.1.3 Pathologie ...................................................................................................... 8
1.1.4 Symptome ...................................................................................................... 9
1.1.5 Verlauf .......................................................................................................... 10
1.1.6 Therapie ....................................................................................................... 11
1.2 Oligodendrozyten und Re-/ Myelinisierung .................................................... 11
1.3 Myelinproteine ................................................................................................ 13
1.4 Wnt/ß-Catenin-Signalweg ............................................................................... 14
1.5 Acetylsalicylsäure ........................................................................................... 16
1.6 Fragestellung / Zielsetzung ............................................................................ 18
2. Material und Methoden ........................................................................................ 19
2.1 Material ........................................................................................................... 19
2.1.1 Versuchstiere ............................................................................................... 19
2.1.2 Geräte ........................................................................................................... 19
2.1.3 Grundlösungen, Zusätze und Chemikalien ................................................ 21
2.1.5 Gebrauchsfertige Lösungen / Kits ............................................................. 25
2.1.6 Primer ........................................................................................................... 26
2.1.7 Antikörper ..................................................................................................... 26
2.1.8 Medikament ................................................................................................. 27
2.1.9 Software ....................................................................................................... 27
2.2 Methoden ....................................................................................................... 28
2.2.1 Puffer- und Lösungszusammensetzungen ................................................ 28
2.2.2 Ansatz der Medikamentenlösung ............................................................... 34
2.2.3 Beschichtung der Kulturflaschen ............................................................... 35
2.2.4 Isolierung primärer Zellen aus P6-P9 C57BL/6-Mäusen ......................... 35
2.2.6 Passagieren der Zellen ................................................................................ 37
2.2.7 Zellzahlbestimmung .................................................................................... 38
2.2.8 MTT-Test ....................................................................................................... 39
2.2.9 BrdU-Test ...................................................................................................... 39
2.2.10 Differenzierungszeitachse ........................................................................ 40
2.2.11 Myelingenexpressionsanalyse .................................................................. 41
2.2.12 Immunozytochemie (ICC) .......................................................................... 45
2.2.13 Statistische Auswertung ........................................................................... 46
3. Ergebnisse ............................................................................................................ 49
3.1 Etablierung der Laborbedingungen ................................................................ 49
3.2 Einfluss von Acetylsalicylsäure auf die metabolische Aktivität primärer OPCs
.............................................................................................................................. 50
3.3 Einfluss von Acetylsalicylsäure auf die Proliferation primärer OPCs ............. 51
3.4 Differenzierung der primären OPCs unter Acetylsalicylsäure ........................ 53
3.4.1 Differenzierungszeitachse .......................................................................... 53
3.4.2 Analyse der Myelingenexpression anhand einer Quantifizierung des
mRNA-Levels .......................................................................................................... 55
3.4.3 Darstellung der Differenzierung mittels immunzytochemischer
Markierung ............................................................................................................. 57
4. Diskussion ............................................................................................................ 59
4.1 Theoretischer Hintergrund ............................................................................. 59
4.1.1 Der Wnt/ß-Catenin-Signalweg als therapeutisch relevanter Signalweg .. 59
4.1.2 Die Rolle des Wnt/ß-Catenin-Signalwegs in der oligodendroglialen
Differenzierung und der Multiplen Sklerose ........................................................ 61
4.1.3 Durch ASS beeinflusste Signalwege und ihre Einsatzmöglichkeiten ....... 63
4.1.4 Einfluss von ASS und anderen NSAR auf den Wnt/ß-Catenin-Signalweg 65
4.1.5 ASS-Dosierung in Versuch und Praxis ........................................................ 67
4.2 Diskussion der Ergebnisse ............................................................................. 68
4.2.1 Einfluss von ASS auf die metabolische Aktivität und Proliferation von
OPCs ....................................................................................................................... 68
4.2.2 Einfluss von ASS auf die Differenzierung von OPCs .................................. 69
4.3 Kritikpunkte an der vorliegenden Arbeit ........................................................ 72
4.3.1 Konzeptionelle Kritikpunkte und Ausblick ................................................. 72
4.3.2 Methodische Kritikpunkte und Ausblick .................................................... 73
Literaturverzeichnis .................................................................................................. 77
Abbildungs- und Tabellenverzeichnis ....................................................................... 95
Lebenslauf ................................................................................................................ 97
Danksagung .............................................................................................................. 98
Anhang .......................................................................................................................... I