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Herstellung und Charakterisierung von Fusionsproteinen aus Green Fluorescent Protein (GFP) und Glykoprotein L (gL) von Herpes simplex-Virus Typ 1 (HSV-1)

Herstellung und Charakterisierung von Fusionsproteinen aus Green Fluorescent Protein (GFP) und Glykoprotein L (gL) von Herpes-simplex-Virus Typ 1 (HSV-1)

Wir untersuchten das Expressionsmuster eines Fusionsproteins aus gL und EGFP/ EYFP in Säugerzellen und das Verhalten bei der Virusreplikation. Mittels PCR wurde das aus dem Vektor pEUKT7C1gL amplifizierte gL-Gen in den Vektor pEGFPgDproT7 kloniert, später die EGFP -Sequenz gegen EYFP ausgetauscht. Die Expression erfolgte unter der Kontrolle des HSV-1 gD-Promotors. Nach der Infektion mit HSV-1 wiesen die Zellen eine ausgeprägte, überwiegend membranständige Autofluoreszenz auf. Es wurden Zelllinien, die das grün/ gelb fluoreszierende Fusionsprotein stabil unter der Kontrolle des viralen Promotors exprimierten, etabliert. Beide Fusionsproteine (ca. 65 kDA) konnten im Western-Blot mit EGFP–spezifischem Antiserum nachgewiesen werden. Es wurde gezeigt, dass das gL -Fusionsprotein in die Virushülle eingebaut wird. Die Hemmung der viralen DNA-Synthese durch Aciclovir bewirkte keine Minderung der gLEGFP-Expression. Das zeitliche Muster der Expression entsprach dem eines Early/Late-Proteins.

Titel: Herstellung und Charakterisierung von Fusionsproteinen aus Green Fluorescent Protein (GFP) und Glykoprotein L (gL) von Herpes simplex-Virus Typ 1 (HSV-1)
Untertitel: Herstellung und Charakterisierung von Fusionsproteinen aus Green Fluorescent Protein (GFP) und Glykoprotein L (gL) von Herpes-simplex-Virus Typ 1 (HSV-1)
Verfasser: Krzemien, Eva Barbara GND
Gutachter: Kühn, Joachim
Organisation: FB 05: Medizinische Fakultät
Dokumenttyp: Dissertation/Habilitation
Medientyp: Text
Erscheinungsdatum: 2010
Publikation in MIAMI: 13.09.2010
Datum der letzten Änderung: 10.05.2016
Schlagwörter: Herpes simplex-Virus Typ-1; gL; gH; Hüllglykoprotein; Fluoreszenzmikroskopie; Fusionsprotein; Green Fluorescent Protein
Fachgebiete: Medizin und Gesundheit; Biowissenschaften; Biologie
Sprache: Deutsch
Format: PDF-Dokument
URN: urn:nbn:de:hbz:6-16479602454
Permalink: https://nbn-resolving.org/urn:nbn:de:hbz:6-16479602454
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