Herstellung und Charakterisierung von Fusionsproteinen aus Green Fluorescent Protein (GFP) und Glykoprotein L (gL) von Herpes simplex-Virus Typ 1 (HSV-1) : Herstellung und Charakterisierung von Fusionsproteinen aus Green Fluorescent Protein (GFP) und Glykoprotein L (gL) von Herpes-simplex-Virus Typ 1 (HSV-1)
Wir untersuchten das Expressionsmuster eines Fusionsproteins aus gL und EGFP/ EYFP in Säugerzellen und das Verhalten bei der Virusreplikation. Mittels PCR wurde das aus dem Vektor pEUKT7C1gL amplifizierte gL-Gen in den Vektor pEGFPgDproT7 kloniert, später die EGFP -Sequenz gegen EYFP ausgetauscht. D...
Verfasser: | |
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Weitere Beteiligte: | |
FB/Einrichtung: | FB 05: Medizinische Fakultät |
Dokumenttypen: | Dissertation/Habilitation |
Medientypen: | Text |
Erscheinungsdatum: | 2010 |
Publikation in MIAMI: | 13.09.2010 |
Datum der letzten Änderung: | 10.05.2016 |
Angaben zur Ausgabe: | [Electronic ed.] |
Schlagwörter: | Herpes simplex-Virus Typ-1; gL; gH; Hüllglykoprotein; Fluoreszenzmikroskopie; Fusionsprotein; Green Fluorescent Protein |
Fachgebiet (DDC): | 570: Biowissenschaften; Biologie
610: Medizin und Gesundheit |
Lizenz: | InC 1.0 |
Sprache: | Deutsch |
Format: | PDF-Dokument |
URN: | urn:nbn:de:hbz:6-16479602454 |
Permalink: | https://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:hbz:6-16479602454 |
Onlinezugriff: | diss_krzemien.pdf |
Wir untersuchten das Expressionsmuster eines Fusionsproteins aus gL und EGFP/ EYFP in Säugerzellen und das Verhalten bei der Virusreplikation. Mittels PCR wurde das aus dem Vektor pEUKT7C1gL amplifizierte gL-Gen in den Vektor pEGFPgDproT7 kloniert, später die EGFP -Sequenz gegen EYFP ausgetauscht. Die Expression erfolgte unter der Kontrolle des HSV-1 gD-Promotors. Nach der Infektion mit HSV-1 wiesen die Zellen eine ausgeprägte, überwiegend membranständige Autofluoreszenz auf. Es wurden Zelllinien, die das grün/ gelb fluoreszierende Fusionsprotein stabil unter der Kontrolle des viralen Promotors exprimierten, etabliert. Beide Fusionsproteine (ca. 65 kDA) konnten im Western-Blot mit EGFP–spezifischem Antiserum nachgewiesen werden. Es wurde gezeigt, dass das gL -Fusionsprotein in die Virushülle eingebaut wird. Die Hemmung der viralen DNA-Synthese durch Aciclovir bewirkte keine Minderung der gLEGFP-Expression. Das zeitliche Muster der Expression entsprach dem eines Early/Late-Proteins.