Herstellung und Charakterisierung von Fusionsproteinen aus Green Fluorescent Protein (GFP) und Glykoprotein L (gL) von Herpes simplex-Virus Typ 1 (HSV-1) : Herstellung und Charakterisierung von Fusionsproteinen aus Green Fluorescent Protein (GFP) und Glykoprotein L (gL) von Herpes-simplex-Virus Typ 1 (HSV-1)

Wir untersuchten das Expressionsmuster eines Fusionsproteins aus gL und EGFP/ EYFP in Säugerzellen und das Verhalten bei der Virusreplikation. Mittels PCR wurde das aus dem Vektor pEUKT7C1gL amplifizierte gL-Gen in den Vektor pEGFPgDproT7 kloniert, später die EGFP -Sequenz gegen EYFP ausgetauscht. D...

Verfasser: Krzemien, Eva Barbara
Weitere Beteiligte: Kühn, Joachim (Gutachter)
FB/Einrichtung:FB 05: Medizinische Fakultät
Dokumenttypen:Dissertation/Habilitation
Medientypen:Text
Erscheinungsdatum:2010
Publikation in MIAMI:13.09.2010
Datum der letzten Änderung:10.05.2016
Angaben zur Ausgabe:[Electronic ed.]
Schlagwörter:Herpes simplex-Virus Typ-1; gL; gH; Hüllglykoprotein; Fluoreszenzmikroskopie; Fusionsprotein; Green Fluorescent Protein
Fachgebiet (DDC):570: Biowissenschaften; Biologie
610: Medizin und Gesundheit
Lizenz:InC 1.0
Sprache:Deutsch
Format:PDF-Dokument
URN:urn:nbn:de:hbz:6-16479602454
Permalink:https://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:hbz:6-16479602454
Onlinezugriff:diss_krzemien.pdf

Wir untersuchten das Expressionsmuster eines Fusionsproteins aus gL und EGFP/ EYFP in Säugerzellen und das Verhalten bei der Virusreplikation. Mittels PCR wurde das aus dem Vektor pEUKT7C1gL amplifizierte gL-Gen in den Vektor pEGFPgDproT7 kloniert, später die EGFP -Sequenz gegen EYFP ausgetauscht. Die Expression erfolgte unter der Kontrolle des HSV-1 gD-Promotors. Nach der Infektion mit HSV-1 wiesen die Zellen eine ausgeprägte, überwiegend membranständige Autofluoreszenz auf. Es wurden Zelllinien, die das grün/ gelb fluoreszierende Fusionsprotein stabil unter der Kontrolle des viralen Promotors exprimierten, etabliert. Beide Fusionsproteine (ca. 65 kDA) konnten im Western-Blot mit EGFP–spezifischem Antiserum nachgewiesen werden. Es wurde gezeigt, dass das gL -Fusionsprotein in die Virushülle eingebaut wird. Die Hemmung der viralen DNA-Synthese durch Aciclovir bewirkte keine Minderung der gLEGFP-Expression. Das zeitliche Muster der Expression entsprach dem eines Early/Late-Proteins.