pH-Taxis: Grundlagen und Versuche mit MV3-Zellen
Die Migration menschlicher Melanomzellen (MV3) ist mit einer Maximalgeschwindigkeit bei pH=7,0 vom extrazellulären pH-Wert abhängig. Weiterhin bilden MV3 Zellen während der Migration ihr eigenes pH-Nanomilieu aus. Daneben herrscht in soliden Tumoren ein saurerer pH-Wert vor als im umgebenden Gewebe,...
Weiterer Titel: | pH-Taxis: Grundlagen und Versuche mit MV3 Zellen |
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Verfasser: | |
Weitere Beteiligte: | |
FB/Einrichtung: | FB 05: Medizinische Fakultät |
Dokumenttypen: | Dissertation/Habilitation |
Medientypen: | Text |
Erscheinungsdatum: | 2015 |
Publikation in MIAMI: | 09.04.2015 |
Datum der letzten Änderung: | 27.07.2015 |
Angaben zur Ausgabe: | [Electronic ed.] |
Schlagwörter: | Melanomzellen; MV3; Zellmigration; pH-Gradient; Tumor; Physiologie |
Fachgebiet (DDC): | 610: Medizin und Gesundheit |
Lizenz: | InC 1.0 |
Sprache: | Deutsch |
Format: | PDF-Dokument |
URN: | urn:nbn:de:hbz:6-99299421474 |
Permalink: | https://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:hbz:6-99299421474 |
Onlinezugriff: | diss_bartel_peter.pdf |
Inhaltsverzeichnis:
- 1. Einleitung
- - 1
- 1.1 Die Idee „pH-Taxis“
- - 1
- 1.2 Erklärungsansätze für eine pH-Taxis
- 4
- 1.2.1 G-Protein gekoppelte Rezeptoren
- 4
- 1.2.2 Manipulation des zelleigenen pH-Nanomilieus
- 6
- 1.2.3 pH-Abhängigkeit anderer Strukturen
- - 6
- 1.3 Richtung der pH-Taxis
- - 7
- 1.4 pH-Begriff
- - 7
- 1.5 Zielsetzung der Arbeit
- - 8
- 2. Material und Methoden
- - 9
- 2.1 Zellkultur
- 9
- 2.1.1 MV3 Zellen
- 9
- 2.1.2 HL-60 Zellen
- 9
- 2.2 Lösungen
- - 10
- 2.3 Polymerasekettenreaktion – PCR
- 10
- 2.3.1 Allgemeines Vorgehen
- - 10
- 2.3.2 Einzelversuche
- - 11
- 2.4 Immunfluoreszenz
- 13
- 2.5 Western Blot
- - 14
- 2.5.1 Zelllyse zur Proteingewinnung
- - 14
- 2.5.2 Durchführung der Western Blots
- 15
- 2.6 Messung intrazellulärer Kalziumsignale
- 15
- 2.7 Etablierung eines extrazellulären pH-Gradienten
- 16
- 2.7.1 Grundlagen
- - 17
- 2.7.2 Messaufbau
- - 19
- 2.7.3 Spülen der μ-Slides
- - 20
- 2.7.4 Aufbau des pH-Gradienten
- - 22
- 2.8 Migrationsversuche – MV3 Zellen
- 24
- 2.8.1 Grundüberlegungen
- 24
- 2.8.2 Einzelversuche
- - 25
- 2.9 Migrationsversuche – HL-60 Zellen
- 26
- 2.10 Statistik
- 27
- 3. Ergebnisse
- - 28
- 3.1 Expression der GPCR auf mRNA-Ebene
- 28
- 3.2 Expression der GPCR auf Proteinebene
- - 30
- 3.2.1 Immunfluoreszenz
- 30
- 3.2.2 Western Blot
- 32
- 3.3 Funktionelle pH-Sensitivität von MV3 Zellen
- 33
- 3.4 Aufbau eines extrazellulären pH-Gradienten
- 35
- 3.4.1 Austauschbarkeit der Lösung in Ibidi μ-Slides
- - 35
- 3.4.2 Gradientenmessungen in HEPES-gepufferter Ringerlösung
- 38
- 3.4.3 Gradientenmessungen in RPMI 1640 Medium
- 41
- 3.5 pH-Taxis von MV3 Zellen
- - 43
- 3.5.1 Vorversuche
- 43
- 3.5.2 Migration in HEPES-gepufferter Ringerlösung
- 43
- 3.5.3 Migration in RPMI 1640 Medium
- 47
- 3.6 pH-Taxis von HL-60 Zellen
- - 51
- 4. Diskussion
- - 52
- 4.1 Methodische Bedeutung des pH-Gradienten
- 52
- 4.2 Ergebnisse der pH-Taxis Versuche
- 55
- 4.3 Richtung der pH-Taxis
- - 56
- 4.4 Erklärung der pH-Taxis und Rolle der GPCR
- - 57
- 4.5 Ausblick
- 59
- Literatur: Artikel
- - 60
- Literatur: Webseiten
- 66
- Abkürzungen
- 67
- Chemikalien
- - 69
- Tabellenverzeichnis
- 71
- Abbildungsverzeichnis
- 72
- Lebenslauf
- - 73
- Danksagung
- - 74.