pH-Taxis: Grundlagen und Versuche mit MV3-Zellen

Die Migration menschlicher Melanomzellen (MV3) ist mit einer Maximalgeschwindigkeit bei pH=7,0 vom extrazellulären pH-Wert abhängig. Weiterhin bilden MV3 Zellen während der Migration ihr eigenes pH-Nanomilieu aus. Daneben herrscht in soliden Tumoren ein saurerer pH-Wert vor als im umgebenden Gewebe,...

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Weiterer Titel:pH-Taxis: Grundlagen und Versuche mit MV3 Zellen
Verfasser: Bartel, Peter
Weitere Beteiligte: Stock, Christian (Gutachter)
FB/Einrichtung:FB 05: Medizinische Fakultät
Dokumenttypen:Dissertation/Habilitation
Medientypen:Text
Erscheinungsdatum:2015
Publikation in MIAMI:09.04.2015
Datum der letzten Änderung:27.07.2015
Angaben zur Ausgabe:[Electronic ed.]
Schlagwörter:Melanomzellen; MV3; Zellmigration; pH-Gradient; Tumor; Physiologie
Fachgebiet (DDC):610: Medizin und Gesundheit
Lizenz:InC 1.0
Sprache:Deutsch
Format:PDF-Dokument
URN:urn:nbn:de:hbz:6-99299421474
Permalink:https://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:hbz:6-99299421474
Onlinezugriff:diss_bartel_peter.pdf
Inhaltsverzeichnis:
  • 1. Einleitung
  • - 1
  • 1.1 Die Idee „pH-Taxis“
  • - 1
  • 1.2 Erklärungsansätze für eine pH-Taxis
  • 4
  • 1.2.1 G-Protein gekoppelte Rezeptoren
  • 4
  • 1.2.2 Manipulation des zelleigenen pH-Nanomilieus
  • 6
  • 1.2.3 pH-Abhängigkeit anderer Strukturen
  • - 6
  • 1.3 Richtung der pH-Taxis
  • - 7
  • 1.4 pH-Begriff
  • - 7
  • 1.5 Zielsetzung der Arbeit
  • - 8
  • 2. Material und Methoden
  • - 9
  • 2.1 Zellkultur
  • 9
  • 2.1.1 MV3 Zellen
  • 9
  • 2.1.2 HL-60 Zellen
  • 9
  • 2.2 Lösungen
  • - 10
  • 2.3 Polymerasekettenreaktion – PCR
  • 10
  • 2.3.1 Allgemeines Vorgehen
  • - 10
  • 2.3.2 Einzelversuche
  • - 11
  • 2.4 Immunfluoreszenz
  • 13
  • 2.5 Western Blot
  • - 14
  • 2.5.1 Zelllyse zur Proteingewinnung
  • - 14
  • 2.5.2 Durchführung der Western Blots
  • 15
  • 2.6 Messung intrazellulärer Kalziumsignale
  • 15
  • 2.7 Etablierung eines extrazellulären pH-Gradienten
  • 16
  • 2.7.1 Grundlagen
  • - 17
  • 2.7.2 Messaufbau
  • - 19
  • 2.7.3 Spülen der μ-Slides
  • - 20
  • 2.7.4 Aufbau des pH-Gradienten
  • - 22
  • 2.8 Migrationsversuche – MV3 Zellen
  • 24
  • 2.8.1 Grundüberlegungen
  • 24
  • 2.8.2 Einzelversuche
  • - 25
  • 2.9 Migrationsversuche – HL-60 Zellen
  • 26
  • 2.10 Statistik
  • 27
  • 3. Ergebnisse
  • - 28
  • 3.1 Expression der GPCR auf mRNA-Ebene
  • 28
  • 3.2 Expression der GPCR auf Proteinebene
  • - 30
  • 3.2.1 Immunfluoreszenz
  • 30
  • 3.2.2 Western Blot
  • 32
  • 3.3 Funktionelle pH-Sensitivität von MV3 Zellen
  • 33
  • 3.4 Aufbau eines extrazellulären pH-Gradienten
  • 35
  • 3.4.1 Austauschbarkeit der Lösung in Ibidi μ-Slides
  • - 35
  • 3.4.2 Gradientenmessungen in HEPES-gepufferter Ringerlösung
  • 38
  • 3.4.3 Gradientenmessungen in RPMI 1640 Medium
  • 41
  • 3.5 pH-Taxis von MV3 Zellen
  • - 43
  • 3.5.1 Vorversuche
  • 43
  • 3.5.2 Migration in HEPES-gepufferter Ringerlösung
  • 43
  • 3.5.3 Migration in RPMI 1640 Medium
  • 47
  • 3.6 pH-Taxis von HL-60 Zellen
  • - 51
  • 4. Diskussion
  • - 52
  • 4.1 Methodische Bedeutung des pH-Gradienten
  • 52
  • 4.2 Ergebnisse der pH-Taxis Versuche
  • 55
  • 4.3 Richtung der pH-Taxis
  • - 56
  • 4.4 Erklärung der pH-Taxis und Rolle der GPCR
  • - 57
  • 4.5 Ausblick
  • 59
  • Literatur: Artikel
  • - 60
  • Literatur: Webseiten
  • 66
  • Abkürzungen
  • 67
  • Chemikalien
  • - 69
  • Tabellenverzeichnis
  • 71
  • Abbildungsverzeichnis
  • 72
  • Lebenslauf
  • - 73
  • Danksagung
  • - 74.

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